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計畫名稱:口腔菌群分子檢測用於牙周病監控診斷平台開發

申請機構:普生股份有限公司

學研機構:國立清華大學

計畫執行期程:104/05/01~105/04/30

計畫摘要
牙周病是一種慢性細菌感染造成的疾病,牙周病的致病因素為各種不同牙周細菌聚集使得牙菌斑堆積。已知與牙周病致病極為相關的細菌包括:牙齦卟啉單胞菌 (Porphyromonas gingivalis, Pg)、齒垢密螺旋體 (Treponema denticola, Td)、福賽斯坦納菌 (Tannerella forsythia, Tf)、中間普氏菌 (Prevotella intermedia, Pi)、核棱桿菌 (Fusobacterium nucleatum,Fn)、伴放線桿菌 (Actinobacillus actinomycetemcomitans, Aa)。 本計畫以即時定量聚合酶鏈鎖反應 (Real-time PCR) 方法檢測牙周病患者於基礎牙周治療前後與口腔保養前後之口腔菌群變化。同時以MALDI Biotyper質譜分析技術調查牙周病人口腔中之特殊菌群分佈,用以監控口腔細菌分佈。 六株牙周病檢測標的細菌 Pg、Pi、Fn、Aa、Tf 與 Td以 PCR 進行測試,實驗結果於膠體電泳顯示預期 126、117、147、101、226 與 105 bp 之 PCR 產物。六株牙周細菌培養, Pg、Pi、Fn 和 Aa 可在巧克力瓊脂和厭氧血液培養基培養;Td 和 Tf 只能在厭氧血液培養基培養。以 Real-time PCR 檢測牙周標得菌株,其專一性達 100 % 。而靈敏度 Pi、Tf 與 Td 最低可測得0.000002 pg/μl,最低定量線性範圍為 2.0 × 100 ~ 2.0 × 108 ,亦為最低可測得 2 隻細菌。以 MALDI Biotyper 方法進行菌株鑑定,其中 Aa、Fn、Pg 和 Pi 四株牙周細菌之鑑定結果,皆符合布魯克 (Bruker) 公司所建立的資料庫圖譜。 臨床試驗結果,導致牙周病之標的菌株分佈,牙周病患者牙齦下佔較高比例。當受試者經基礎牙周治療及使用oh care P113+ 抑菌漱口水可使厭氧菌群比例下降。牙周病非標的菌株Streptococcus pneumoniae 牙周病人唾液及牙齦下有較高比例,經基礎牙周治療及使用oh care 漱口水,此菌株則有明顯下降。健康人口腔中含有較高比例的益生菌 Streptococcus salivarius,而牙周病人因口腔菌叢改變,造成此益生菌比例大幅下降,但經使用 oh care 漱口能有效增加口腔內益生菌。以即時定量聚合酶鏈鎖反應 (Real-time PCR) 方法檢測,證實oh care P113+ 抑菌漱口水能有效降低牙周標的細菌,而 Pg 與 Tf 菌株抑菌率可達 86.9~99 %。 本計畫已完成建立口腔基因檢測平台,可當牙周病檢測之指標,並且建立各菌株安全指數作為判定標準,未來可依個人口腔狀況提供精準口腔護理建議,並且提供高危險群牙周病人追蹤及幫助一般民眾即早預防牙周病的問題。